
培養(yǎng)基制備一般在化驗(yàn)室中進(jìn)行,主要是對(duì)培養(yǎng)基和玻璃儀器進(jìn)行滅菌,主要設(shè)備為高壓滅菌鍋及于熱滅菌箱,對(duì)無菌操作要求不高。
滅菌方法主要有干熱、濕熱滅菌等。
(1)干熱滅菌 直接利用火焰將微生物燒死(如燒接種環(huán)、載玻片和試管口等)。不能用火焰滅菌的物品則利用熱空氣滅菌,將物品放在烘箱中加熱。為了保證滅菌效果,一般規(guī)定:135~140℃滅菌3~5h; 160~170℃滅菌2~4h;180~200℃滅菌0.5~1h。此法適用于玻璃、金屬和木質(zhì)的器皿。在滅菌過程中或滅菌后未降溫時(shí),不宜打開箱門,否則紙與棉塞會(huì)燃燒,玻璃儀器也易破裂。
(2)濕熱滅菌 在各類濕熱滅菌法中,經(jīng)高壓蒸汽滅菌效果最好,其蒸汽溫度可達(dá)121℃,能將耐熱的芽孢在30min內(nèi)全部殺死。但對(duì)某些易破壞的物質(zhì),如某些糖或有機(jī)含氧化合物,宜在0.06MPa下(11O℃)滅菌15~30min。使用高壓滅菌鍋時(shí),盡量將鍋內(nèi)的冷空氣排盡,以免壓力表的指示壓力已到規(guī)定值而鍋內(nèi)溫度達(dá)不到要求溫度。另外,滅菌結(jié)束后,要緩慢放汽,以免降壓太快使液體培養(yǎng)基噴染棉塞。
3.保溫室
恒溫箱的容量有限,因此利用大三角瓶及卡氏罐等容器培養(yǎng)微生物,應(yīng)放在保溫室中進(jìn)行。保溫室不宜過大,通常面積為2㎡,高2m左右。墻壁用保溫材料,室頂在適當(dāng)位置設(shè)置換氣筒。室內(nèi)使用暖氣或電熱器配合自動(dòng)控溫調(diào)節(jié)設(shè)備進(jìn)行控溫,應(yīng)注意安全。
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