(1)磷酸-18-鎢酸鈉法
原理：樂果經(jīng)水解后，其巰基乙酸和磷酸-18-鎢酸鈉作用而產(chǎn)生藍(lán)色。
試劑：氫氧化鈣粉末；磷酸-18-鎢酸鈉固體試劑（稱取鎢酸鈉10g，溶于50mL蒸餾水中，加入7.5 mL 85%磷酸，通過冷凝管回流6h后，除去冷凝管，加入數(shù)滴溴水，使溶液呈棕黃色，再煮沸30min使顏色褪去，倒入蒸發(fā)皿中，加入25 g硅膠粉末攪拌均勻，置烘箱中烘干，所得白色粉末放入玻璃瓶中保存?zhèn)溆茫?
操作方法：取酒樣30 mL，加等量蒸餾水稀釋，分別用氯仿20，15，10mL分3次提取，合并提取液于瓷蒸發(fā)皿中，揮去有機(jī)溶劑，殘?jiān)? mL蒸餾水洗下，放入試管中備用。
樣品處理液于瓷反應(yīng)板凹穴處，加入0.5～1g氫氧化鈣粉末，用玻璃棒攪拌均勻，使呈明顯堿性，放置1～2min。
加入磷酸-18-鎢酸鈉固體試劑0.5 g左右于上述樣品中央，不要攪動(dòng)，靜置5 min，如呈現(xiàn)藍(lán)色即證明有樂果存在。
(2)薄層色譜酶抑制法
原理：膽堿酯酶能分解乙酰膽堿和其他酸類。酶將乙酸β-萘脂分解，產(chǎn)生萘酚，萘酚和牢固藍(lán)作用生成玫瑰色。但有機(jī)磷農(nóng)藥能抑制酶的活性，因而不產(chǎn)生萘酚，所以有農(nóng)藥斑點(diǎn)處不能形成玫瑰紅。
試劑：薄層板（取硅膠5g，加蒸餾水10 mL，研磨均勻，涂制成0.25 mm厚度的薄板，陰干后于105℃下活化1h，置干燥器中備用）；展開劑（苯+甲醇=9+1）；噴霧劑（a．酶試劑。取新鮮鼠肝1份，于乳缽中研磨，陸續(xù)加水9份，制成勻漿。離心，取上清液注入消毒瓶中，置冰箱冷凍層保存，臨時(shí)使用時(shí)，視其靈敏度稀釋10～20倍。b．顯色劑。甲液：稱取乙酸萘脂125mg溶于100mL無水乙醇中；乙液：稱取牢固藍(lán)20mg溶于16 mL水中，現(xiàn)用現(xiàn)配。臨用時(shí)取甲液4 mL加入乙液中，混勻后使用）；標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)磷溶液（用氯仿準(zhǔn)確制成含有有機(jī)磷農(nóng)藥——敵敵畏、樂果各1mg／mL的溶液）。
操作方法：取標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)磷溶液和樣品液各5 mL，分別點(diǎn)板，置層析缸內(nèi)，用10mL展開劑擴(kuò)展至10cm處，取出揮干有機(jī)溶劑，噴酶試劑至薄板均勻濕潤，置37%恒溫水浴鍋臺面保溫40 min，取出薄層板揮干，噴顯色劑，數(shù)分鐘后，在玫瑰紅色的背景上，顯出白色斑點(diǎn)，即表明有有機(jī)磷農(nóng)藥存在。本法的靈敏度為5×10-6 μg。
